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測定人血漿中25-OH-VD2 和 25-OH-VD3含量的檢測方法
更新時間:2018-12-03   點擊次數:6739次

 

說起補鈣,營養專家認為:生長期、孕期、更年期、老年期要補 ,鈣的補充是一種常態,而且會貫穿人一生。每個人都需要補鈣,但是大部分時候,我們只需通過日常飲食就可以獲取所需的鈣元素。而那些真正需要額外補充鈣劑的,多是處于青春期、孕期、更年期、老年期這些階段的人群。

 

鈣能不能吸收和維生素D是否缺乏有關

我們補鈣的目的是為了骨骼的健康,從口服鈣到沉積在骨骼上的幾個環節都需要維生素D參加。維生素D是骨骼健康的重要指標,主要功能是維持人體內鈣的代謝平衡以及骨骼形成。研究表明維生素D缺乏會引起一系列疾病,與人體免疫功能異常、心血管疾病、代謝性疾病、自身免疫性疾病、腫瘤等密切相關。由于公眾增加關注維生素D缺乏對于身體健康的影響,在過去的幾年內,樣品數量檢測大大增加。

 

維生素D (Vitamin D) 是類固醇的衍生物,又可分為維生素D2(麥角鈣化醇)和維生素D3(膽鈣化醇)。維生素D2體內無法產生,來自于飲食攝取,多含于植物性食物中,它是由植物的麥角固醇經陽光照射而合成的。人體皮下儲存有從膽固醇生成的7-脫氫膽固醇,受紫外線的照射后,可轉變為維生素D3,也可從強化奶或其他肉類食物中獲得。

 

所以臨床對25-羥維生素D的濃度監測具有非常重要的意義,評估維生素D營養狀態,協助對高鈣血癥、骨質疏松癥、佝僂病、甲狀旁腺亢進和25羥化缺陷等疾病的臨床診斷,指導臨床醫生對心血管疾病、自身免疫病、糖尿病和某些藥物的治療與補充。

 

多數學者認為,人體血中25-羥維生素D營養判斷標準如下:

 

目前常用的檢測25-羥維生素D含量的方法有競爭性蛋白結合法(CPBA)、放射免疫法(RIA)、酶聯免疫吸附法(ELISA)、化學發光免疫測定法(CLIA)、液相色譜法(HPLC)等。這些方法大部分耗時、步驟冗雜,無法滿足臨床簡便、高通量的要求;并且血液中 維生素D濃度太低,檢測限達不到要求。

 

這次我們仍舊使用明星產品SOLA HRP對血漿樣品進行預處理,使用Syncronis C18色譜柱保留分離VD,建立了測定人血漿中25-OH-VD2 和 25-OH-VD3含量的檢測方法。

 

前處理步驟:

10mg 2mL SOLA HRP 96 孔板

(PN:60309-001)

活化

500℃甲醇,500μL 含2% 甲酸的水

上樣

200μL 血漿

清洗

200μL 含水/ 甲醇(60:40)

洗脫

200μL 甲醇2 次

40℃氮氣吹干后用水:

乙腈定容到100μL

 

LC方法:

色譜柱:

Syncronis C18 1.7μm 50×2.1 mm

(PN:97102-052130)

流動相:

A: 水+0.1% 甲酸

B: 乙睛+0.1% 甲酸

梯度方法:

2min 內,70-100%B

流速:0.8mL/min

柱溫:40℃

進樣量:50μL

 

靈敏度:

LOQ 5ng/mL

 

線性范圍:

血漿中25- 羥基Vit D2 和25- 羥基Vit D3在5 -1000ng/mL 濃度范圍成線性,r2=0.9968 和0.9981

 

回收率結果:

血漿樣品添加25-OH Vit D2 和25-OH Vit D3 的回收率>94%,RSD<4.0%。

 

體內維生素D濃度的準確定量是診斷維生素D缺乏相關疾病診斷和治療反饋效果的重要指標。采用SOLA HRP對樣品進行預處理,Syncronis C18液相色譜柱保留,所得25-OH-VD2 和 25-OH-VD3的LOQ、標準曲線、回收率均符合臨床檢測要求,具有非常高的靈敏度、特異性和準確性,適用于血漿基質中維生素D臨床樣本的快速檢測。

 

后小編啰嗦一句,體內維生素D的水平,決定每個人補充維生素D的利弊。我們不推薦沒有任何理由地普遍補充維生素D。

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