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梯度方法開發(fā)攻略之梯度條件的影響因素
更新時間:2019-10-10   點擊次數(shù):2820次

今天,將為您帶來梯度方法開發(fā)攻略②:梯度條件的影響因素,共同探討在梯度條件下需要注意哪些因素。

 

1. 不同色譜柱的分離選擇性

2. 梯度斜率

3. 初始有機相比例

4. 梯度拐點設(shè)置

5. 流動相或柱溫優(yōu)化

 

 

 不同色譜柱的分離選擇性

 

 

不同色譜柱的疏水性、表面極性存在差異,因此化合物的出峰時間也會受到影響,我們可以根據(jù)化合物的特性選擇合適的色譜柱。

 

 梯度斜率

 

梯度斜率  N =Δ B% / tGra (% / min)

梯度斜率越大,洗脫速度越快,但分離度同時下降。

 

 初始有機相比例

 

初始比例  Binitial %,通常對于早出峰的化合物保留分離影響大。

 

 梯度拐點設(shè)置

 

合理設(shè)置梯度拐點,可以有效地縮短分析時間。

 

  流動相或柱溫優(yōu)化

 

溫度從35℃升高到45℃,增強了化合物的分離度。

 

調(diào)整流動相比例,可以有效縮短分離時間。

 

通過更換色譜柱柱長、粒徑、流速、來獲得快速分析結(jié)果。

 

梯度分析中需要注意的幾個問題

 

1)梯度條件需要進行充分洗脫;

2)梯度進行完畢需要重新平衡回初始狀態(tài),才能進行下一個梯度序列的分析;

3)梯度條件會造成基線漂移,需要進空白樣確定梯度基線變化;

4)注意觀察壓力變化情況;

5)當(dāng)流動相中含有緩沖鹽時,在梯度有機相高點不得鹽析。

 

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