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賽默飛色譜柱系列三大氨基柱的區(qū)別及維護(hù)
更新時(shí)間:2018-05-09   點(diǎn)擊次數(shù):4144次

無論氣相還是液相,色譜柱都是分離的核心。液相色譜柱的固定相可以說是五花八門,有C18,C8,C4,苯基柱,氰基柱,氨基柱等等。色譜柱使用的好壞,直接關(guān)系到分析分離的結(jié)果,我們都知道氨基柱有使用壽命短等問題,今天在這里給大家?guī)戆被氖褂镁S護(hù)指南,希望通過更好的維護(hù)使用,讓我們手中的色譜柱發(fā)揮出更大的作用。

 

說起氨基柱,大家熟悉的是拿它來做糖的分析。這是一個(gè)典型的HILIC模式。除了HILIC模式以外,氨基柱還可以用做正相和弱陰離子交換兩種模式。可以說應(yīng)用范圍和模式非常廣。

 

ThermoFisher色譜柱系列大家族中擁有三款氨基鍵合相的色譜柱,分別是Hypersil GOLD Amino、Syncronis Amino和Hypersil APS-2。有人會(huì)問,都是氨基柱,他們的區(qū)別又在哪里呢?

 

讓小編來給大家一一做個(gè)介紹。Hypersil Gold Amino這款氨基柱具有更對(duì)稱的峰型,在生產(chǎn)工藝上有更致密的鍵合技術(shù),硅膠表面殘存的硅醇基數(shù)量低。Syncronis Amino這款氨基柱金屬雜質(zhì)含量在同類色譜柱中低,能夠帶來更高的柱效,而Hypersil APS-2這款氨基柱在分離多組分化合物時(shí)更具優(yōu)勢(shì),并且在美國(guó)藥典和歐洲藥典中多有應(yīng)用。說了這么多我們看看下面該如何使用維護(hù)。

 

保存液

(Gold Amino和Syncronis Amino)出廠保存液為乙醇,APS-2柱出廠保存液為:異辛烷:乙醇:水=85:14.7:0.3,新色譜柱如果使用反相流動(dòng)相條件,請(qǐng)充分置換色譜柱內(nèi)正相溶劑。

活化

新色譜柱如果使用HILIC模式,使用前請(qǐng)使用異丙醇小流速過夜平衡色譜柱。流速建議0.1mL/min,之后再轉(zhuǎn)換到100%乙腈沖洗20柱體積,然后轉(zhuǎn)換到和流動(dòng)相相同比例的不含鹽的乙腈水體系沖洗20柱體積。

沖洗

用乙腈:水=60:40條件對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗,清洗時(shí),不建議水相比例超過40%,過高使用水相容易導(dǎo)致鍵合相水解。

色譜柱再生

當(dāng)色譜柱經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間使用,柱效很低時(shí),可以對(duì)色譜柱再生處理,用乙腈:水(水中加入0.05%氨水)=60:40條件沖洗30柱體積。

 

 

保存

一個(gè)月以內(nèi)的保存,請(qǐng)使用與所選用流動(dòng)相組成相同的有機(jī)溶劑和水的混合溶液(不含酸、無機(jī)鹽)進(jìn)行置換,請(qǐng)避免只用水進(jìn)行置換;一個(gè)月以上的長(zhǎng)期保存,在進(jìn)行了上述處理之后,請(qǐng)用乙腈置換并保存。

氨基柱糖類的分析

1

請(qǐng)?jiān)O(shè)定乙腈/水的流動(dòng)相條件。乙腈的濃度越高,則對(duì)糖的保留能力越強(qiáng)。

2

若采用含甲醇或緩沖鹽的流動(dòng)相,峰會(huì)展寬。

3

若將糖的水溶液作為樣品注入,譜峰會(huì)展寬。請(qǐng)使用含乙腈50%以上的溶劑來配制糖類樣品。

4

曾在酸性條件下使用過的色譜柱,糖類分析的保留時(shí)間、峰形會(huì)發(fā)生變化。

離子型物質(zhì)的分析

1

請(qǐng)?jiān)O(shè)定乙腈/磷酸緩沖液且具有一定pH值的流動(dòng)相條件。

2

考察流動(dòng)相條件時(shí),按照pH由高到低的順序進(jìn)行考察。如果曾經(jīng)在低pH下使用,填料的表面將無法回到初始狀態(tài)。

3

有時(shí)需要長(zhǎng)時(shí)間平衡色譜柱(24小時(shí)以上)。平衡所需時(shí)間與通液量和鹽濃度緊密相關(guān),因此,時(shí)間緊急時(shí)請(qǐng)?zhí)岣吡魉伲騪H不變而增加流動(dòng)相的鹽濃度來進(jìn)行平衡。

 

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