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鴻朗科技帶您了解維生素A、D、E的測定
更新時間:2018-04-10   點擊次數:3052次

 

維生素 A(retinol)、維生素 D(vitamin D2 和 vitamin D3)、維生素E(tocopherol)是機體維持正常代謝和機能的所必需的脂溶性維生素。其中維生素 E 有 8 種異構體形式,即4 種生育酚(α、β、γ、δ-tocopherols)和 4 種三烯生育酚(α、β、γ、δ-tocotrienols),均具有重要的生物活性,被認為是一類主要的抗氧化劑。通常α-生育酚被報道是活性高的一種維生素E 形式,因此很多文獻報道的分析方法僅測定了α-生育酚的含量。近研究表明,其他幾種異構體形式也在人體中具有重要的作用,并且γ-生育酚具有抗癌作用。維生素E 異構體結構的復雜性和活性的差異,決定了建立一種準確可靠的分析方法,來分離和測定食品基質中各個異構體含量,具有重要意義。如何進行食品中維生素A、D、E的測定呢?

 

新版國標GB5009.82-2016對維生素E的四種異構體的分析提出了要求。而常規C18色譜柱很難將其實現基線分離。另外維生素 D 也是嬰幼兒配方食品中一種重要的營養素,在用常規反相C18分析D2 和D3 異構體的時候經常遇到分離度差的問題。

 

本文建立了同時測定食品中D和E含量的液相色譜法,可實現對維生素E的四種異構體和D2和D3兩種異構體的分析及準確定量。

樣品前處理

取維生素 D2、D3 和E 標準品適量,精密稱定,至25 mL 量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,制成濃度分別為 1.0 mg/mL 維生素 D3 和 D2 溶液和 2.06 mg/mL 維生素 E 儲備溶液。

 

分別精密量取維生素 D3 和 E 的標準品溶液適量,至 10 mL 棕色量瓶中,配制成混合溶液,再分別精密加入等量的濃度為 10 μg/mL 的維生素 D2 的內標溶液,甲醇稀釋至刻度,分別得到濃度為:ɑ-VE:2.4μg/ml,ß-VE:2μg/ml,γ-VE:1.6μg/ml、δ-VE:2.4μg/ml, D3: 0.08μg/ml.

 

儀器方法

 

四種維生素E異構體分析的色譜條件:

方法一

色譜柱:Acclaim C30

4.6×250 mm,5 μm(貨號:075718)

流動相:甲醇-水

流速:0.8mL/min

檢測器:紫外,296nm

柱溫:20℃

進樣量:10μL

儀器:Ultimate 3000

 

圖1 四種維生素E的實驗圖譜:Acclaim C30

 

 

 

方法二

色譜柱:Accucore PFP

3.0×150 mm,2.6 μm(貨號:17426-153030)

或 GOLD PFP 4.6×250 mm,5 μm(貨號:25405-254630)

流動相:甲醇-水

流速:0.6mL/min (Accucore PFP), 1ml/min(GOLD PFP)

檢測器:紫外,296nm

柱溫:20℃

進樣量:10μL

儀器:Ultimate 3000

 

圖2 四種維生素E的實驗圖譜:Accucore PFP

 

圖3 四種維生素E的實驗譜圖:GOLD PFP

 

兩種維生素D異構體分析的色譜條件:

色譜柱:Hypersil Green PAH

4.6×150 mm,3 μm(貨號:31103-154630)

流動相:乙腈:甲醇=60:40

流速:1mL/min

檢測器:紫外,264nm

柱溫:35℃

進樣量:10μL

儀器:Ultimate 3000

 

圖4  兩種維生素D異構體的實驗圖譜

 

結論

采用賽默飛公司Acclaim C30,Accucore PFP,GOLD PFP及Hypersil Green PAH 色譜柱可按照國標GB 5009.82-2016條件對維生素ADE進行分析,并對各化合物有較好的保留和分離。

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